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蛋白质分离色谱之疏水色谱

发布日期:2015-07-01阅读次数:1957

蛋白质表面有些疏水基团,在裂隙内部疏水基团更多,在较大浓度的盐水体系中与疏水填料配基会有疏水作用而保留,在稀盐溶液中蛋白质被洗脱。

疏水色谱只能用于生物大分子的分离,不能用于小分子分离,常用于前几步工艺的初步分离和蛋白质复性中。疏水色谱上样量一般小于离子交换色谱而大于凝胶色谱;分辨率也是小于离子交换色谱而大于凝胶色谱。其特别之处在于上样时盐浓度可以很大,盐浓度越大,保留越大。

在以上所说疏水色谱使用的盐是指盐析性盐,如 (NH4)2SO4,Na2SO4 等。在这些盐的浓溶液中蛋白质溶解度减小,但稳定性增加。另一种盐叫盐溶性盐,如盐酸胍和硫氰酸盐,在这些盐的浓溶液中蛋白质溶解度增大,但稳定性减小,甚至可逆性失活。盐溶性盐不能用于疏水色谱流动相。

用于蛋白质制备的疏水介质的基质是琼脂糖。配基主要有丁基、辛基和苯基。

 

名称

配基

疏水性

应用

丁基琼脂糖微球

-OC 4H 9(-NC 4H 9,-SC 4H9)

乙肝疫苗、蛋白质等分离

辛基琼脂糖微球

-OC 8H 17

蛋白质分离

苯基琼脂糖微球

-OPh

蛋白质分离