蛋白质分离色谱之疏水色谱
发布日期:2015-07-01阅读次数:2730
蛋白质表面有些疏水基团,在裂隙内部疏水基团更多,在较大浓度的盐水体系中与疏水填料配基会有疏水作用而保留,在稀盐溶液中蛋白质被洗脱。
疏水色谱只能用于生物大分子的分离,不能用于小分子分离,常用于前几步工艺的初步分离和蛋白质复性中。疏水色谱上样量一般小于离子交换色谱而大于凝胶色谱;分辨率也是小于离子交换色谱而大于凝胶色谱。其特别之处在于上样时盐浓度可以很大,盐浓度越大,保留越大。
在以上所说疏水色谱使用的盐是指盐析性盐,如 (NH4)2SO4,Na2SO4 等。在这些盐的浓溶液中蛋白质溶解度减小,但稳定性增加。另一种盐叫盐溶性盐,如盐酸胍和硫氰酸盐,在这些盐的浓溶液中蛋白质溶解度增大,但稳定性减小,甚至可逆性失活。盐溶性盐不能用于疏水色谱流动相。
用于蛋白质制备的疏水介质的基质是琼脂糖。配基主要有丁基、辛基和苯基。
名称 |
配基 |
疏水性 |
应用 |
丁基琼脂糖微球 |
-OC 4H 9(-NC 4H 9,-SC 4H9) |
弱 |
乙肝疫苗、蛋白质等分离 |
辛基琼脂糖微球 |
-OC 8H 17 |
中 |
蛋白质分离 |
苯基琼脂糖微球 |
-OPh |
强 |
蛋白质分离 |
-
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